一、细胞培养用PBS缓冲液的使用方法：

  在细胞培养过程中，PBS缓冲液是一种不可缺少的平衡盐溶液。在细胞传代操作中，常用PBS缓冲液洗涤细胞，以去除细胞表面的杂质、残留的培养基以及未贴壁的细胞等，且不会对细胞造成损伤。在细胞计数操作中，可作为稀释液用于稀释试剂、细胞悬液等，保证试剂和细胞在合适的浓度下进行实验操作，同时维持其活性和稳定性。

  在使用PBS缓冲液进行细胞实验之前，首先应选择合适的PBS缓冲液，可根据细胞类型、实验目的进行选择。如哺乳动物细胞实验常用pH值在7.2-7.4之间的PBS缓冲液；昆虫细胞适合用pH值在6.2-6.4之间且离子强度略低的PBS缓冲液；植物细胞一般用pH值在5.8-6.0之间且离子强度较低的PBS缓冲液。细胞密度较高的情况下，可能需要适当增加PBS用量以确保充分洗涤；对于一些对PBS成分敏感的细胞，用量应尽量精准，避免因PBS残留对细胞产生不良影响。若用于细胞洗涤，常规的PBS缓冲液即可；若需进行细胞消化、解离，为避免钙镁离子影响，可选无钙镁离子的PBS缓冲液；需要为细胞提供一定营养时，可选择添加了相应营养成分的PBS缓冲液。

  在使用PBS缓冲液进行细胞实验过程中，需要注意PBS缓冲液的使用方法及用量。对于细胞计数，若要将细胞稀释到合适的浓度范围以便计数，需根据细胞初始浓度和目标浓度计算PBS的用量。对于贴壁细胞洗涤，在移除细胞培养液后，可用适量PBS轻轻冲洗细胞表面1-2次，每次1-2分钟，以去除残留的培养液、血清及代谢产物等杂质。如在培养瓶中，可将PBS缓慢加入，轻轻晃动培养瓶使PBS覆盖细胞表面，然后吸去PBS。对于悬浮细胞，可将细胞悬液转移至离心管中，离心后弃去上清液，再加入PBS重悬细胞，再次离心后弃去上清，达到洗涤细胞的目的。

  对于细胞消化前洗涤，可在移除细胞培养液后，加入胰酶消化液前，用无钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次，每次1-2分钟，降低血清对胰酶活性的抑制作用，提高消化效果。消化完成后，加入血清即可终止消化，血清中的蛋白可使胰酶失活。一般来说，细胞实验需使用提前预热到室温的PBS，但对于一些贴壁能力强，难消化的细胞，也可用预冷到4℃的胰酶进行细胞洗涤，以取得更好的消化效果。对于T25培养瓶中的细胞洗涤，PBS的用量约为2mL -3mL，对于较大面积的培养瓶或培养皿，如75 cm²的培养瓶，PBS的用量可适当增加到8mL -15mL。

二、细胞培养用PBS缓冲液的注意事项：

  在使用PBS缓冲液进行细胞实验时，应注意PBS缓冲液的溶液状态、pH值、渗透压、低内毒素、无菌操作、温度控制等。

  PBS缓冲液在使用前要观察PBS溶液的状态，如发现有微粒、浑浊、沉淀或颜色变化等异常情况，说明PBS可能已被污染或变质，应立即弃用，重新配制或更换新的PBS；良好的PBS缓冲液通常要求pH值在7.2-7.4之间，以维持细胞的正常生理功能和活性。渗透压应在270-315 mOsm/kg H2O之间，与细胞内环境的渗透压相似，防止细胞因渗透压的改变而发生失水或吸水，从而保持细胞的正常形态和功能。内毒素含量需极低，一般要求内毒素≤0.5 EU/mL或更低，因为过高的内毒素可引发细胞的炎症反应和其他不良影响，干扰细胞的正常代谢和实验结果。

  细胞培养要求严格的无菌环境，PBS需经过严格的灭菌处理，如高压蒸汽灭菌或0.22 μm滤膜过滤除菌。在使用过程中，要遵循无菌操作原则，避免PBS被微生物污染。打开的PBS溶液在使用时，应防止瓶口接触到其他物品，使用后及时盖紧瓶盖。PBS在使用前应平衡至合适的温度，避免因温度过低或过高对细胞造成刺激或损伤。如果是冷冻保存的PBS，应避免反复冻融，因为这可能会导致PBS中的成分发生变化，影响其缓冲能力和离子平衡，进而影响细胞培养效果，可将PBS分装成小份后冷冻，使用时取出一份解冻即可。

三、细胞培养用PBS缓冲液产品展示：

  青岛高科技工业园海博生物技术有限公司生产的PBS和DPBS缓冲液产品，均采用过滤除菌工艺，在百级洁净室中进行无菌灌装，每批产品均已通过无菌测试，并且经过严格的质量控制测试，包括pH、渗透压、内毒素等测试，内毒素含量不超过0.01EU/mL，立博球探论坛结果如图2。产品详情请参考：常见的细胞平衡盐溶液介绍及选择以及PBS和DPBS产品。

图1 PBS缓冲液产品的内毒素立博球探论坛结果

样品1：我公司生产的PBS缓冲液产品的内毒素立博球探论坛结果；样品2：我公司生产的DPBS缓冲液产品的内毒素立博球探论坛结果。

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