常见问题解答

PCR电泳无扩增条带

                         
（1）酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。（2）模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。（3）变性温度是否准确：PCR仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。（4）反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶，应在未加Taq酶以前，将反应体系95℃加热5-10分钟。（5）引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化，或因储存条件不当而失活。（6）引物错误。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。（7）DNA凝胶电泳时加入阳性对照，确保不是DNA凝胶和PCR程序的问题。

其它问题

如何有效设计引物

为什么菌落总数培养条件为36±1℃培养48±2h，而水产品要求30±1℃培养72±3h？

为什么平板计数琼脂需要高压蒸汽灭菌，而结晶紫中性红胆盐琼脂只需煮沸灭菌？

为什么平板计数琼脂需要调节pH？

怎样区分细菌菌落与食品颗粒？