常见问题解答

扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散

                         
（1）酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。（2）dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。（3）MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。（4）模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。（5）引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。（6）循环次数过多；增加模板量减少循环次数至30，缩短退火时间及延伸时间，或改用二种温度的PCR循环。（7）退火温度过低。（8）电泳体系有问题：①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大；②凝胶没有凝固好；③琼脂糖质量差。（9）若为PCR试剂盒则可能：①由于运输储存不当引起试剂盒失效；②试剂盒本身质量有问题，如引物选择、循环参数等选择不当。（10）降解的陈旧模板扩增也易产生涂布。

其它问题

PCR产物量过少

PCR电泳无扩增条带

如何有效设计引物

为什么菌落总数培养条件为36±1℃培养48±2h，而水产品要求30±1℃培养72±3h？

为什么平板计数琼脂需要高压蒸汽灭菌，而结晶紫中性红胆盐琼脂只需煮沸灭菌？