常见问题解答

扩增产物出现多条带（杂带）

                         
（1）引物用量偏大，引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。（2）循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。（3）酶的用量偏高或酶的质量不好，应降低酶量或调换另一来源的酶。（4）退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的PCR扩增。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。（5）样品处理不当。（6）Mg2+浓度偏高，因适当调整Mg2+使用浓度。（7）若为PCR试剂盒，也可能时试剂盒本身质量有问题。（8）复制提前终止。使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。（9）反应缓冲液未完全融化或未充分混匀。确保反应缓冲液融化完全并彻底混匀。（10）引物特异性差。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。（11）引物量过多。减少反应体系中引物的用量。（12）模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。（13）外源DNA污染。确保操作的洁净。

其它问题

扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散

PCR产物量过少

PCR电泳无扩增条带

如何有效设计引物

为什么菌落总数培养条件为36±1℃培养48±2h，而水产品要求30±1℃培养72±3h？